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高效封闭剂-更高效的可防止放射性标记探针与膜非特异性结合的封闭剂

2022-02-20 03:04:34

第2章DNA分析69中的单拷贝序列,当时的放射自显影背景有许多杂点或杂带(如),在今天那样的结果是不能发表的。

但是,几年来各个领域取得的显著进步提高了杂交的灵敏度及重复性,现在我们通常都可以获得完美的杂交结果。最为重要的改进是使用了比硝酸纤维素膜更耐用、结合能力更强的尼龙膜作为固相支持物。

另外,DNA现在经过转移后共价结合于膜上,避免了由于高温处理硝酸纤维素膜时DNA被洗脱而引起的问题(Haas )。其他的进步还包括:

●多种更有效的从胶上转移DNA到膜上的方法,如向下毛细管转移(Lichtenstein ; Chomczynski 1992)、真空印迹(Medveczky et ; Olszewska and Jones1988; Tmovsky 1992)双向印迹(请见方案9)、碱性缓冲液中转移( Reed and Mann1985)。

●简洁的体外标记,可获得更高特异性的探针(Feinberg and Vogelstein 1983,1984)。

●更高效的可防止放射性标记探针与膜非特异性结合的封闭剂(ChurchandGilbert1984)。

●使用高敏感度的感光影像仪高效显像。这些改进方法在“如何将DNA从胶上转移到膜上”的方案11和方案12可见。放射性标记探针与固定化DNA杂交的方案见方案13.以上技术方案适用于经限制性内切核酸酶消化后的哺乳类动物基因组DNA的Southerm分析,

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